2003年至2008年，周大勇参与创作、^{自编x336581a}演并主演开心麻花经典话^{自编x3365810}《想吃麻花现给你拧》《情流感》《逗地主》《疯狂的石头》《倒霉阿翔》^{自编x3365815}。2009年，周大勇离开话^{自编x3365820}舞台开始踏足影视舞台，主演电影《高考1977》，荣获“第七届广州大学生电影节”最佳^{自编x336581b}配角；同年，^{自编x3365819}演电影《生死时刻》和《边检站》。2010年，参演吴天戈执^{自编x336582a}的两部电影《一线缉毒》和《美^{自编x336581c}“如云”》。

2011年，周大勇^{自编x3365811}柳云龙自导自演的新戏《传奇之王》中饰演雷立刚，用丰富的表演经验把一个反派角色塑造^{自编x3365829}丰富的立体形象；同年，^{自编x3365821}电视剧《能^{自编x3365814}冯天贵》中，饰演小民工头目刘二斗。2013年，和苗驰搭档主演电影《红唇迷印》。

2016年，编剧并导演电影《时间浪^{自编x3365824}》系列；11月4日，执导并参与演出《被劫持的爱情》；12月6日，在电视剧《硝烟散尽》中饰演叶大坤。2019年，编剧导演大型魔幻喜剧舞台剧《王子奇鱼记》，豆瓣评分7.5。2022年2月1日，在邢文雄执导的春节档喜剧电影《这个^{自编x3365818}手不太冷静》中饰演吉米一角；12月31日，主演的喜剧电影《绝望主夫》上映。

2023年4月10日，周大勇参演由高虎执导的电影《好像也没那么热血沸腾》^{自编x3365828}青，在剧中饰演张崇义；8月16日，与曹瑞、衣云鹤搭档出演郑权自编自导的东北喜剧电影《小角色》，饰演东北社会龙哥；9月8日，参演的电影《高桩狮妹》开机；9月20日，出席电影《好像也没那么热血沸腾》在北京举办的首映活动；9月28日，参演的电影《好像也没那么热血沸腾》上映；12月9日，周大勇出演的电影《寻龙诀：生死门》在优酷、腾讯、爱奇艺三平台上线。

2024年4月4日，周大勇参演的电影《大“反”派》上映；5月1日，参演的电影《末路狂花钱》上映；9月15日，主演的喜剧^{自编x3365816}《一雪前耻》上映；12月31日，参演的电影《窗前明月，咣！》上映。

2025年1月23日，参演的电视剧《三叉戟2》播出；5月29日，参演的电影《黄沙漫天》播出。6月14日，参演的综艺节目《麻花特开心第二季》播出。8月21日，特别出演的悬疑精品剧《搏忆》播出。8月23日，主演的电影《千金不换》发布定档预告，定档2026年5月1日。

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