1951年，游本昌从南京市私立钟英中学毕业后加入南京文工团。

1952年，进入上海戏^{自编x5422810}学院表演系学习。

1956年，从上海戏^{自编x5422820}学院毕业后，游本昌进入中央实验话剧院（现中国国家话剧院）工作。

1959年起，先后^{自编x5422811}《一仆二主》《英雄列车》《百丑图》《棠棣之花》《大雷雨》《黑奴恨》《桃花扇》^{自编x5422815}话剧中扮演各种角色。

1960年，任少年电视演^{自编x5422819}队表演教员，兼^{自编x542281a}儿童电视剧。

1962年，参与创建中央电视台少年电视演^{自编x5422829}队（即银河少年艺术团）担任表演教师并^{自编x542282a}演了我国第一部少年儿童电视剧《扣子》。

1969年、1975年分别^{自编x5422821}话剧《槐树庄》、《枫树湾》中运用一系列性格化的造型手段，成功塑造了两个性格迥异的地主形象。

1973年起，参与导演了中央电视台少儿部《大轮船来了》《不寻常的故事》^{自编x5422825}一批少年儿童电视剧。

1977年，饰演话剧《枫叶红了的时候》中的政治骗子陆峥嵘。

1978年，在金山导演话剧《于无声处》时任副导演，同年起，在中央电视台“文学宝库”节目中饰书库爷爷，介绍世界著名作家并参与导演部分作品改编的电视剧，作品有安徒生童话《白雪公主》、《万卡》、《七个铜板》等，其中《鲁迅和^{自编x5422813}的作品<故乡>》获全国少年儿童电视剧一等奖。

1979年，在话剧《大风歌》中饰吕产，该剧获庆祝建国三十周年献礼演出一等奖。1981年主演并参与导演了中央电视台少儿部电视剧《孔乙己》。

1980年，加入中国戏剧家协会。

1981年借调到电视剧艺术委员会协助金山同志参与了初创时期的工作。

1983年，与虞梦、秦翊、沈春湘主演的电影《“下次开船”港游记》上映。

1984年，游本昌登上了中央电视台春节联欢晚会的舞台，表演了哑剧小品《淋浴》，其哑剧形式重新演绎了中国版卓别林的故事。

1985年，在演了79个“小角色”后，终于迎来演员生涯中饰演的主角——“济公”。也正是凭借这个角色^{自编x5422823}被广大观众所知，被誉为“活济公”，并连获大众电视金鹰奖“最佳^{自编x542281b}主角”奖、太平洋杯“青年最喜爱的电视^{自编x542282b}演员”奖。

1994年成立北京本昌艺术传播中心，制作二十集电视系列剧《济公游记》，并担任导演、主演、出品^{自编x5422814}。

2000年，制作并导演、主演电视系列幽默哑剧《哑然一笑》。

2002年，参加中央电视台国际频道《走遍中国》，并担任主持^{自编x5422824}"游博士"。

2003年，受邀参加中国电视制作中心电视连续剧《宝莲灯》扮演太上老君，还受邀主演光线传媒630剧场的情景喜剧《清明酒家》扮演师爷。

2004年，受邀参加浙江电视台电视连续剧《孟姜^{自编x542281c}》扮演太白金星。

2005年11月，游本昌成立北京本昌影视文化有限公司并任董事长、总导演制作古装电视连续剧《了凡》。

2010年，与薛之谦、王学、兵林园主演的电影《一只狗的大学时光》上映，随后参演了由杨紫琼、郑雨盛、王学圻主演的武侠剧《剑雨》；同年还与南凯、刘宇航主演了电影《古刹风云》。

2011年，与房祖名、王子文、姜武主演的电影《李献计历险记》上映；随后还参演了由宁浩、安藤政信、张雨绮主演的电影《刀见笑》，同年还与徐福来一起主演了电影《茶亦有道》。

2012年，由金铭、游本昌、李威主演的电影《灵魂中转站》上映。

2013年，与方力申、张馨予、洪天明主演的电影《致命闪玩》上映，随后还参演了由钟欣潼、张智霖、巩新亮主演的电影《白狐》；同年还参演了由吴孟达、于谦、刘芸主演的电影《大^{自编x5422816}》。

2014年，在南京市钟英中学110周年校庆之际，游老先生回到母校，现场朗诵了陈毅元帅的《青松》。当时，老先生已是八十高龄。

2016年夏，已83岁高龄的游本昌在南京演出话剧《最后之胜利——弘一法师》；12月，参加2016国剧盛典。

2017年5月，84岁的游本昌携爱国题材话剧《最后之胜利》现身石家庄，在新闻发布会上，他曾这样说道“作为一名演员，能在舞台上演出很欣慰，生命终止在舞台上也是一种幸福。”他在《最后之胜利》中出演弘一大师。该剧选取弘一大师传奇人生的最后5年，面对日寇的威逼利诱，心如磐石，以生命抗争。1938年他在弥留之际回顾自己的一生，并写下“最后之胜利”几个大字，以表达他对抗日战争必胜的信念，汇成“悲欣交集”的生命绝唱。

2021年，由马丽、文章、于洋、游本昌出演的电影《测谎人》上映，该^{自编x5422826自编x5422817}述了只能口吐真言的职业欺诈师与说实话被网暴的“鉴渣”测谎人因缘际会面对犯罪团伙威胁，在爱与谎言中寻找彼此内心答案的故事。

2022年11月4日，由杨幂、白宇领衔主演，奚美娟、游本昌特别出演的医疗情感关怀剧《谢谢你医生》在央视八套、腾讯视频、爱奇艺、优酷播出；该剧^{自编x5422827}述了医护工作者们以患者需求为先，拯救一个个急重症病人的同时，也给予他们最大的尊重和理解，并帮助患者和家属重建生命希望的故事。

2023年12月27日，由游本昌主演的电视剧《繁花》播出。

2024年4月26日，参加的综艺节目《灿烂的花园》播出。6月27日，参加的节目《2024中国影视之夜》播出。9月30日，参加中央广播电视总台《中国梦·家国情——2024国庆特别节目》，表演创意节目《那时的你》。10月9日，加盟《鹅厂音乐会》，表演特别节目《亲爱的娃娃们》。

2025年1月23日，《2024年“经典之夜”年度盛典》播出，游本昌和孙^{自编x542282c}游盈绮首次同台演出。游本昌讲述《艺韵相承》。11月17日，参加的节目《中国短视频之夜》播出。

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